Prinsip,Langkah Metode Counting Cell

Prinsip Metode Conting Cell

Sebuah Counting Cell , juga dikenal sebagai hemositometer, adalah slide mikroskop yang khusus dirancang untuk memungkinkan menghitung sel. Slide memiliki wastafel di pertengahan, area wastafel ditandai dengan kotak. Setetes dari kultur sel ditempatkan di wastafel. Melihat sampel di bawah mikroskop , peneliti menggunakan grid untuk secara manual menghitung jumlah sel-sel di daerah tertentu. Kedalaman wastafel adalah standar, sehingga volume budaya dihitung dapat dihitung dan dengan itu konsentrasi sel. Menghitung kamar sering digunakan dalam jumlah darah klinis. 

Keuntungan mereka adalah menjadi murah dan cepat, ini adalah membuat mereka metode perhitungan yang lebih disukai dalam percobaan biologis cepat dalam yang perlu hanya ditentukan apakah kultur sel telah tumbuh seperti yang diharapkan. Biasanya budaya diperiksa perlu diencerkan, jika kepadatan tinggi sel akan membuat tidak mungkin menghitung. Kebutuhan untuk pengenceran adalah kerugian, karena setiap pengenceran menambahkan ketidakakuratan untuk pengukuran. 

Langkah-langkah Metode Counting Cell 

1. Pastikan penutup-slip dan haemocytometer yang bersih dan bebas lemak (gunakan alkohol untuk membersihkan). 
2. Melembabkan (dengan air atau menghembuskan napas) dan membubuhkan menutup-slip untuk haemocytometer tersebut. 
3. Carilah "Cincin Newton & s" yang menunjukkan bahwa kaca penutup telah melekat melalui hisap untuk haemocytometer tersebut. Newton & s cincin refraksi dilihat sebagai pelangi seperti cincin bawah kaca penutup-. 
4. Campur volume yang sama 0,4% tripan biru noda dan suspensi sel tercampur dengan baik (tidak terlalu keras) misalnya campuran biru tripan 100μl noda dengan 100 ml suspensi sel. 
5. Pipet tripan biru / campuran sel (sekitar 10μl) di tepi penutup-slip dan memungkinkan untuk dijalankan di bawah kaca penutup. 
6. Visualise grid haemocytometer bawah mikroskop, lihat gambar 1 untuk layout grid. Harap diperhatikan: i. Tripan Biru merupakan "noda penting", melainkan dikeluarkan dari sel-sel hidup. ii. Sel-sel hidup muncul berwarna dan terang (refractile) di bawah fase kontras. iii. Sel-sel mati noda biru dan non-refractile. iv. Untuk membantu akurasi dan konsistensi jumlah sel menggunakan sistem penghitungan diilustrasikan pada gambar 2. 
7. Menghitung sel layak (hidup) dan mati dalam satu atau lebih kotak sudut yang besar dan jumlah catatan sel. 
8. Dianjurkan untuk menghitung sekitar 40 sampai 70 sel untuk mendapatkan jumlah sel yang akurat - karena itu mungkin diperlukan untuk menghitung lebih dari satu sudut alun-alun besar. 
9. Untuk menghitung konsentrasi sel per ml: 
Rata-rata jumlah sel dalam satu faktor pengenceran x persegi besar * x 10 4 * Faktor pengenceran biasanya 2 (1:01 dilusi dengan tripan biru), tetapi mungkin perlu untuk lebih encer (atau berkonsentrasi) suspensi sel.
10 4 = Faktor konversi untuk mengkonversi 10-4ml untuk 1ml (lihat gambar 3 untuk melihat diagram pengaturan dan dimensi) Perhitungan Viabilitas your: Jumlah Sel layak Dihitung x 100 sel layak =% Jumlah Sel Dihitung (Layak + mati)
 
Jangan lupa di LIKE ya, klik tobol LIKE di sebelah kanan atas, ok